Влияние комплекса фитогормонов на жизнеспособность и мутационный процесс при естественном старении семян твердой пшеницы
На примере 10 образцов твердой пшеницы, длительно хранившихся в холодильной камере и частично потерявших всхожесть и генетическую целостноcть, показаны регуляторные способности смеси фитогормонов кинетина и гиббереллина. Генетические последствия старения семян и дальнейшей обработки фитогормонами оценивались по тесту хромосомных аберраций в клетках корневой меристемы 2-3-дневных проростков. Было выявлено, что смесь растворов кинетина и гиббереллина, в концентрации 10-2 мкг/мл стимулировала прорастание семян и оказывала модифицирующее влияние на спонтанный мутационный процесс при естественном старении семян твердой пшеницы.
Долговечность семян, период, в течение которого семена остаются жизнеспособными, является важным признаком не только для адаптации растений к изменяющимся условиям окружающей среды, но также для сельского хозяйства и сохранения биоразнообразия. Снижение продолжительности жизни семян часто связано с окислением клеточных макромолекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки и липиды [8, с. 660]. Сухие семена снабжены различными механизмами защиты от стресса, однако после длительного периода хранения повреждения постепенно накапливаются в ДНК, РНК и белках, которые необходимы для прорастания семян [8, с. 663]. Качество семян является суммой физиолого-биохимических показателей, которые могут сильно варьировать под воздействием условий окружающей среды при сохранении генотипа сорта [1, с.3].
О регуляторных свойствах фитогормонов известно из многих источников [3, c.59; 7, с. 20; c. 163]. Эти органические, сравнительно низкомолекулярные эндогенные вещества, с помощью которых осуществляется взаимодействие различных клеток, органов и тканей, необходимы для запуска, регуляции и выключения морфогенетических и физиологических программ [7, c.6]. Согласно современным представлениям о месте и роли этих соединений в жизнедеятельности растительных организмов, они в отличие от любого другого метаболита регулируют направленность всего метаболизма клеток, вызывая изменения в их структурной организации функциональной активности [4, c.5].
Целью исследования было, на примере образцов твердой пшеницы, длительно хранившихся в холодильной камере и частично потерявших всхожесть и генетическую целостноcть, показать регуляторные способности смеси фитогормонов кинетина и гиббереллина.
Объекты и методы исследования. Объектами исследования служили семена образцов 10 разновидностей твердой пшеницы, хранившихся в условиях холодильной камеры Национального Генбанка Азербайджана в течение 15 лет: ВВ05К-107 v.leucurum, ВВ05К-128 v.apulicum, ВВ 05К-114 v.leucomelan, ВВ 05К-103 v.melanopus, ВВ 05К-31 v.affine, ВВ 05К-163 v.hordeiforme, ВВ 05К-72 v.boenfii, ВВ 05К-74 v.murciense, ВВ 05К-79 v.niloticum, ВВ 05К-178 v.erythromelan. Оценка жизнеспособности проводилась по тесту лабораторной всхожести семян, выражаемой в процентах от общего числа (n): , где А – число взошедших семян [2, с.85].
Семена образцов твердой пшеницы обрабатывали раствором кинетина и гиббереллина в концентрации 10-2 мкг/мл, в течение 24 часов, затем промывали в дистиллированной воде и проращивали до момента фиксации. Контролем служили семена, замачиваемые в дистиллированной воде. В каждом варианте опыта использовали по 100 семян. Семена проращивались в чашках Петри в термостате при температуре 25оС.
Генетические последствия естественного старения семян и дальнейшей их обработки фитогормонами оценивали по тесту хромосомных аберраций в клетках апикальной меристемы 2-3-х дневных проростков семян [4, c.4]. Для цитологического анализа корешки помещали в раствор Карнуа. Корешки окрашивались ацетокармином. На временных давленых препаратах учитывали частоту аберраций хромосом и митотическую активность в ана-телофазе первого митоза зародышевых корешков [5, с. 40; 6, с.102].
Результаты и их обсуждение
В таблице приведены показатели всхожести, митотической активности и аберраций хромосом семян при поступлении в Генбанк, хранившихся в холодильной камере в течение 15 лет и после их обработки фитогормонами. Для оценки функциональных нарушений жизнеспособности семян всех испытуемых образцов использовался такой интегральный показатель, как их всхожесть. Всхожесть семян образцов при поступлении на хранение составляла 98,0–100%. Одним из тестов для оценки вероятности возникновения генетических нарушений является определение частоты хромосомных аберраций. Спонтанный уровень аберраций хромосом во всех вариантах варьировал в пределах 2,31–3,89%., а митотическая активность от 14,0 до 18,0%.
Анализ всхожести семян после хранения их в холодильной камере в течение 15 лет при температуре 5–7ᵒС показал, что естественное старение подавляло прорастание семян. Причем, у различных образцов это ингибирование проявлялось в разной степени. Так, у образцов ВВ 05К - 114 v.leucomelan и ВВ05К-72 v.boenfii отмечено максимальное понижение всхожести семян (на 35,0%), наименьшая потеря всхожести наблюдалась у образца ВВ 05К-178 v.erythromelan (на 23,0%). Как известно, во время хранения в семенах происходят и накапливаются повреждения хромосом. На клеточном уровне организации живой системы носителем информации является генетический аппарат. Очевидно, что ему присущи такие фундаментальные характеристики живого, как устойчивость и изменчивость. Показателем дисбаланса этих процессов на хромосомном уровне является их мутационная активность [4, с.40]. Исследования показали, что после длительного хранения в условиях Генбанка, частота хромосомных аберраций у большинства образцов выросла более чем в 2 раза и составила: v.leucurum - 6,2%, v.apulicum – 4,78%, v.leucomelan - 6,15, v.melanopus – 4,9%, v.affine – 5,15% v.hordeiforme – 7,41%, v.boenfii – 7,31%, v.mujiense – 5,26%, v.niloticum – 8,86%, v.erytromelan – 4,8%. Наибольшее увеличение частоты хромосомных аберраций наблюдалось у образца ВB05К-79 v.niloticum (5,86%), а наименьшее – у ВВ05К-128 v.apulicum (1,27%). Митотическая активность клеток корневой меристемы образцов также была снижена на 4,0% (BB05К-163 v.hordeiforme) – 10,0% (BB05К-79 v.niloticum).
Таблица
Влияние кинетина и гиббереллина (10-2 мкг/мл) на всхожесть, митотическую активность и частоту аберраций хромосом образцов твердой пшеницы длительное время хранившихся в холодильной камере
Образцы |
Варианты опыта |
Всхожесть, % |
Кол-во анафаз |
Измененные анафазы |
Митотич. активность |
|
число |
M ± m, % |
|||||
ВВ 05К-107 v.leucurum |
Свежие семена |
100,0 |
865 |
20 |
2,31 ± 0,51 |
16,0 ± 0,59 |
Хранение |
72,0 ± 4,49 |
802 |
53 |
6,20 ± 0,83 |
9,0 ± 0,57 |
|
К+Г |
90,0 ± 3,0 |
715 |
28 |
3,91 ± 0,72 |
13,0 ± 0,67 |
|
ВВ05К-128 v.apulicum |
Свежие семена |
100,0 |
919 |
23 |
2,5 ± 0,51 |
18,0 ± 0,62 |
Хранение |
69,0 ± 4,62 |
878 |
42 |
4,78 ± 0,72 |
10,0 ± 0,6 |
|
К+Г |
85,0 ± 3,57 |
806 |
23 |
2,85 ± 0,58 |
15,0 ± 0,71 |
|
ВВ 05К-114 v.leucomelan |
Свежие семена |
100,0 |
912 |
21 |
2,30 ± 0,50 |
15,0 ± 0,58 |
Хранение |
65,0 ± 4,76 |
1082 |
71 |
6,15 ± 0,50 |
8,0 ± 0,54 |
|
К+Г |
85,0 ± 3,57 |
837 |
35 |
4,18 ± 0,69 |
11,0 ± 0,62 |
|
ВВ 05К-103 v.melanopus |
Свежие семена |
98,0±1,4 |
926 |
27 |
2,91 ± 0,55 |
17,0 ± 0,61 |
Хранение |
70,0 ± 4,58 |
938 |
46 |
4,9 ± 0,71 |
10,0 ± 0,6 |
|
К+Г |
86,0 ± 3,46 |
902 |
28 |
3,1 ± 0,57 |
14,0 ± 0,69 |
|
ВВ 05К-31 v.affine |
Свежие семена |
99,0 ± 0,99 |
874 |
25 |
2,86 ± 0,56 |
16,0 ± 0,59 |
Хранение |
68,0 ± 4,66 |
1008 |
52 |
5,15 ± 0,69 |
8,0 ± 0,54 |
|
К+Г |
85,0 ± 3,57 |
782 |
36 |
4,6 ± 0,74 |
12,0 ± 0,64 |
|
ВВ 05К-163 v.hordeiforme |
Свежие семена |
98,0 ± 1,4 |
928 |
29 |
3,12 ± 0,57 |
14,0 ± 0,56 |
Хранение |
71,0 ± 4,53 |
800 |
64 |
7,41 ± 0,89 |
10,0 ± 0,6 |
|
К+Г |
85,0 ± 3,57 |
830 |
38 |
4,57 ± 0,72 |
13,0 ± 0,67 |
|
ВВ 05К-72 v.boenfii |
Свежие семена |
100,0 |
922 |
23 |
2,4 ± 0,50 |
17,0 ± 0,61 |
Хранение |
65,0 ± 4,76 |
849 |
67 |
7,31 ± 0,86 |
7,0 ± 0,51 |
|
К+Г |
85,0 ± 3,57 |
742 |
27 |
3,63 ± 0,68 |
11,0 ± 0,62 |
|
ВВ 05К-74 v.murciense |
Свежие семена |
98,0 ±1,4 |
835 |
32 |
3,89 ± 0,66 |
15,0 ± 0,58 |
Хранение |
68,0 ±4,66 |
912 |
48 |
5,2 ± 0,74 |
8,0 ± 0,54 |
|
К+Г |
85,0 ± 3,57 |
907 |
32 |
3,52 ± 0,61 |
12,0 ± 0,64 |
|
ВВ 05К-79 v.niloticum |
Свежие семена |
99,0 ± 0,99 |
831 |
25 |
3,0 ± 0,59 |
17,0 ± 0,61 |
Хранение |
73,0 ± 4,52 |
997 |
97 |
8,86 ± 0,86 |
10,0 ± 0,6 |
|
К+Г |
88,0 ± 3,24 |
893 |
46 |
5,15 ± 0,73 |
13,0 ± 0,67 |
|
ВВ 05К-178 v.erythromelan |
Свежие семена |
98,0 ±1,4 |
833 |
27 |
3,24 ± 0,61 |
16,0 ± 0,59 |
Хранение |
75,0 ± 4,33 |
1000 |
48 |
4,8 ± 0,67 |
9,0 ±0,57 |
|
К+Г |
88,0 ± 3,24 |
796 |
26 |
3,26 ± 0,62 |
12,0 ± 0,64 |
Анализ результатов обработки семян раствором смеси кинетина и гиббереллина в концентрации 10-2 мкг/мл, показал, что всхожесть семян всех образцов поднялась на 13,0-20,0%, причем наибольшее увеличение всхожести было характерно образцам ВВ 05К-114 v.leucomelan и ВВ 05К-72 v.boenfii. Частота аберраций хромосом во всех вариантах достоверно на 0,55–3,71%. Наименьшее снижение частоты хромосомных аберраций наблюдалось у образца ВВ05К-31 v.affine (0,55%), а наибольшее – у ВВ05К-79 v.niloticum (3,71%). Пролиферативная активность клеток также значимо возросла на 3,0-5,0%, что говорит о стимулировании митотической активности апикальной меристемы проростков.
Таким образом, комплексное применение регуляторов роста кинетина и гиббереллина в концентрации 10-2 мкг/мл способно достоверно понизить уровень аберраций хромосом, стимулировать митотическую активность апикальной меристемы проростков и повысить всхожесть семян, длительное время хранившихся в холодильной камере.
- Алексейчук Г.Н. Сила роста семян зерновых культур и ее оценка методом ускоренного старения. // Мн.: Право и экономика, 2009. 44 с.
- Мамедова С.А., Ибрагимова З.Ш., Алиев Р.Т. Оценка устойчивости различных образцов пшеницы к старению, засухе и засолению // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. М.: РАЕ, 2018, № 12. С. 84-87.
- Музурова О.Г. Экологические перспективы использования природных рострегуляторов для предотвращения загрязнения агрофитоценозов озимой пшеницы. Авт.дисс. … канд.с/х. наук. Курган, 2009. 21 с.
- Нагиева Дж.Н. Цитогенетические эффекты некоторых регуляторов роста растений. Авт. дис. … канд. биол. наук. Баку, 1993. 24 с.
- Нагиева Дж.Н., Мамедова С.А. Влияние хлорхолинхлорида на жизнеспособность и мутационный процесс при естественном старении семян твердой пшеницы. Естествознание и технические науки: глобальные вызовы, тренды, возможности/ Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции. Белгород: ООО АПНИ, 2019. С. 39-41.
- Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. М: Агропромиздат, 1988. 271с.
- Чумикина Л.В., Арабова Л.И., Колпакова В.В., Топунов А.Ф. Фитогормоны и абиотические стрессы// Химия растительного сырья, 2021. №4. С.5-30.
- Naoto Sano, Loïc Rajjou, Helen M. North et al. Staying Alive: Molecular Aspects of Seed Longevity // Plant and Cell Physiology, Volume 57, Issue 4, April 2016, Pages 660–674 https://doi.org/10.1093/pcp/pcv186
- Wani S.H., Kumar V., Shriram V., Sah S.K. Phytohormones and their metabolic engineering for abiotic stress tolerance in crop plants // The Crop Journal. 2016. Vol. 4(3). Pp. 162–176. DOI: 10.1016/j.cj.2016.01.010.