Видовое разнообразие микробиоты цервикального канала у беременных женщин

Первико-вагинальная микробиота имеет первостепенное значение в поддержании физиологических процессов, происходящих в урогенитальном тракте, поскольку она является динамичной микросредой богатой гетерогенными микроорганизмами, среди которых идентифицируют бактерий, грибы, вирусы и простейших. Качественный состав микробиоты представлен симбиотическими, условно-патогенными и патогенными микроорганизмами. Среди симбиотических бактерий ключевую роль играют Lactobacillus spp., продуцирующих молочную кислоту, перекись водорода и бактериоцины, биохимические свойства которых главным образом направлены на защиту слизистой оболочки влагалища от колонизации патогенными микроорганизмами [1]. Наиболее значимыми высокопатогенными микроорганизмами являются бета-гемолитические стрептококки, к которым относятся S. anginosus, S. pyogenes и S. agalactiae. Однако последние имеют высокую клиническую ценность в акушерско-гинекологической практике в силу того, что данная бактерия представляет крайнюю опасность в отношении плода: имея наиболее выраженные адаптационно-вирулентные свойства, микроорганизм способен проникать через гистогематический и гематоэнцефалический барьеры, что в дальнейшем приводит к развитию сепсиса, пневмонии и менингита. Причем наличие данного патогена на слизистых влагалища и цервикального канала клинически и симптоматически не отражается на здоровье и состоянии матери, именно поэтому при планировании беременности акушеры-гинекологи согласно приказу от Минздрава России от 20.10.2020 №1130, в обязательном порядке должны проводить взятие биоматериала из влагалища и цервикального канала на идентификацию S. agalactiae [2]. Также важно отметить, что микроорганизмы, подвергаясь воздействию эндогенных и экзогенных факторов, приобретают новые адаптационные свойства, способствующие повышению их выживаемости и вирулентности, что имеет важное значение в развитии инфекционных процессов, сопровождающихся появлением серьезных осложнений [3]. Сдача биоматериала на исследование цервико-вагинальной микробиоты является важной составляющей гинекологического осмотра, которая позволяет врачу провести корреляцию между собранным анамнезом и полученными результатами, что впоследствии облегчает постановление диагноза и назначение корректной терапии.

Целью нашей работы являлось исследование структуры микробиоты цервикального канала при беременности.

В качестве биологического материала для микробиологического исследования послужили мазки, взятые ватным тампоном со слизистых оболочек цервикального канала, которые впоследствии были помещены в транспортные среды и доставлены в бактериологическую лабораторию. Далее был произведен посев микроорганизмов на питательные среды: Сабуро, универсальный хромогенный агар (Uriselect 4 BioRad, США), 5% кровяной агар. После посева микроорганизмов на питательные среды чашки Петри помещали для инкубации в термостат на 48 часов при температуре 37 градусов. Далее проводили масс-спектрометрию (MALDI-ToF MS) с использованием масс-спектрометра (Bruker Corporation, Microflex LT, «Bruker», Германия) для идентификации микроорганизмов, присутствующих в биоматериале, взятого из цервикального канала. В период с 2018–2022 год было взято 11383 образца из цервикального канала женщин. Из 11383 образцов в 8148 был выявлен рост микроорганизмов и в 3235 роста не наблюдалось. Среди положительных образцов было идентифицировано 13411 микроорганизмов, среди которых были обнаружены следующие: 3447 Lactobacillus spp. (25,7%), 4104 Staphylococcus spp. (30,6%), 758 Streptococcus spp. (5,65%), 1141 Escherichia spp. (8,5%), 62 Enterobacter spp. (0,46%), 2270 Enterococcus spp. (16,93%), 1629 Candida spp. (12,2%).

Далее была проведена выборка, которая была разделена на две категории в соответствии с диагнозами: первая – наблюдение за течением нормальной первой беременности (Z34.0), вторая – преждевременный разрыв плодных оболочек, начало родов до 24 часов (О42). Такое разделение позволило наблюдать за изменениями качественного и количественного состава микробиоты, которые происходили во второй категории, относящейся к патологии, относительно первой, которая соответствовала норме.

В первой группе было выявлено 3094 микроорганизма, среди которых было идентифицировано 1710 Lactobacillus spp. (55,3%), 459 Staphylococcus spp. (14, 84%), 150 Streptococcus spp. (4,9%), 5 Enterobacter spp. (0,16%), 237 Enterococcus spp. (7,7%), 457 Candida spp. (14,8%), 76 Escherichia spp. (2,5%). Среди Lactobacillus spp. были выявлены следующие виды: 1054 L. crispatus (61,64%), 123 L. gasseri (7,19%), 310 L. jensenii (18,13%), 109 L. salivarius (6,37%), 18 L. johnsonii (1, 05%), 34 L. delbrueckii (2%), 23 L. fermentum (1,04%), 13 L. iners (0,76%), 1 L. garviae (0, 10%), 3 L. plantarum (0,20%), 14 L. rhamnosus (0,82%), 2 L. paracasei (0,12%), 4 L. mucosae (0, 23%), 1 L. sakei (0, 10%), 1 L. kitasatonii (0, 10%).

Среди Streptococcus spp. было выявлено: 86 S. agalactiae (57,33%), 34 S. vestibularis (22, 70%), 16 S. salivarius (10,70%), 1 S. gordonii (0, 70%), 4 S. mitis (2, 70%), 5 S. gallolyticus (3,33%).

Среди Enterobacter spp. были выявлены: 1 E. cloacae (20%), 4 E. aerogenes (80%).

Среди Enterococcus spp.: 230 E. faecalis (97,10%), 4 E. faecium (1,70%), 1 E. avium (0,42%), 1 E. durans (0,42%), 1 E. gallinarum (0,42%).

Среди Candida spp.: 439 C. albicans (96,06%), 2 C. kefyr (0,44%), 9 C. krusei (2%), 2 C. lusitaniae (0,44%), 2 C. dubliniensis (0,44%), 3 C. glabrata (0,70%).

Среди Escherichia spp. 76 E. coli.

Во второй группе было выявлено 2703 микроорганизма, среди которых идентифицировано 193 Lactobacillus spp. (7, 4%), 1159 Staphylococcus spp. (42,9%), 181 Streptococcus spp. (6,7%), 20 Enterobacter spp. (0, 74%), 661 Enterococcus spp. (24,5%), 230 Candida spp. (8, 51%), 259 Escherichia spp. (9,58%).

Среди Lactobacillus spp. были выявлены следующие виды бактерий: 125 L. crispatus (64, 8%), 25 L. jensenii (12,95%), 20 L. gasseri (10, 36%), 20 L. salivarius (10, 36%), 3 L. fermentum (1,55%).

Среди Staphylococcus spp. идентифицированы 320 S. epidermidis (27,61%), 250 S. hominis (21,57%), 534 S. haemolyticus (46,07%), 51 S. aureus (4,4%), 3 S. warneri (0,26%), 1 S. pasteuri (0,09%).

Среди Streptococcus spp. 103 S. agalactiae (56,91%), 27 S. vestibularis (14,92%), 16 S. salivarius (8,84%), 6 S. oralis (3,32%), 15 S. anginosus (8,29%), 11 S. mitis (6,18%), 3 S. parasanguinis (1,66%).

Среди Enterobacter spp. 9 E. aerogenes (45%), 10 E. cloacae (50%), 1 E. asburiae (5%).

Среди Enterococcus spp. 649 E. faecalis (98,19%), 5 E. faecium (0,76%), 2 E. hirae (0,30%), 1 E. durans (0,15%), 1 E. avium (0,15%), 1 E. casseliflavus (0,45%).

Среди Candida spp. 229 C. albicans (99,57%), 1 C. dubliniensis (0, 44%).

Среди Escherichia spp. 259 E. coli (100%), причем среди данного вида в единичном количестве встречались гемолитические штаммы.

Проведя исследование, было установлено, что во второй категории количество S. aureus возросло в 2,32 раза относительно первой. Вирулентность данного патогена проявляется в способности продуцировать пирогенный экзотоксин, впоследствии приводящего к развитию синдрома менструального токсического шока. Численность S. agalactiae во второй группе увеличилось в 1,2 раза, а S. anginosus в 15 раз. Эти бактерии представляют наибольший интерес в клинической практике в связи с тем, что относятся к группе высокопатогенных бета-гемолитических стрептококков. Однако S. agalactiae отводится ключевая роль в развитии патологических процессов и болезней у плода, которые впоследствии могут привести к летальному исходу.

Количество E. coli во второй категории увеличилось в 3,4 раза, что, предположительно, может быть связано с пренебрежением правил личной гигиены. Количество Candida spp. в первой группе в 2 раза выше относительно второй, несмотря на превалирующее количество Lactobacillus spp. в 8,9 раз. Слизистые оболочки влагалища в период гестации наиболее подвержены колонизации Candida spp., что это связано с увеличением количества гликогена.

Таким образом, проведя исследование, нами был определен качественный и количественный состав микробиоты цервикального канала, среди которого были идентифицированы Lactobacillus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Candida spp., Enterobacter spp., Enterococcus spp., Escherichia spp. Помимо этого, также была установлена корреляция между частотой встречаемости представителей выше перечисленных родов и течением беременности: количество патогенных микроорганизмов, выявленных у женщин с преждевременным разрывом плодных оболочек, было значительно увеличено: S. aureus в 2,32 раза, S. agalactiae в 1,2 раза, S. anginosus в 15 раз, E. coli в 3,4 раза, однако численность Candida spp. была в 2 раза меньше. Это позволяет предположить, что развитие, течение и исход беременности осложняются присутствием в микробиоте цервикального канала условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, которые оказывают неблагоприятное влияние на здоровье матери и плода. Вследствие этого, такие осложнения, как невынашивание, беременности могут быть связаны с деятельностью микроорганизмов, колонизирующих слизистые оболочки цервикального канала и влагалища.